Análise dos danos do processo de vitrificação por microgotículas e otimização do crioprotetor

Peng Tian ,  

Zhang Xiaomin ,  

Zhou Xinli ,  

摘要

O sistema de vitrificação por microgotículas gera microgotas de tamanho reduzido, permitindo a vitrificação com baixas concentrações de crioprotetores a baixas temperaturas. Este estudo utilizou o sistema de microgotículas para vitrificar células HepG2, investigando o dano celular durante o processo de carregamento do crioprotetor, pulverização, recepção e vitrificação/recongelamento. A fórmula do crioprotetor foi otimizada reduzindo a concentração de Me2SO e adicionando uma quantidade adequada de trealose. Os resultados mostraram que todos os processos do sistema de vitrificação por microgotículas causam danos às células; o carregamento do crioprotetor, a pulverização, a vitrificação e o descongelamento causaram danos maiores, enquanto o processo de recepção causou danos menores. Além disso, com a redução da concentração de Me2SO no crioprotetor, a viabilidade celular diminuiu significativamente após a preservação a baixas temperaturas; com a mesma concentração do crioprotetor, a vitrificação apresentou melhor efeito do que o congelamento lento; uma quantidade adequada de trealose melhorou o efeito da preservação a baixas temperaturas, enquanto o excesso teve efeito contrário; utilizando 5% de Me2SO + 0,3 mol/L de trealose como crioprotetor para vitrificação, a taxa de sobrevivência celular atingiu (92,42±0,95)%, a taxa de adesão após 24 h foi de (95,64±1,03)% e o efeito da vitrificação por microgotículas foi o melhor.

关键词

Microgotículas;Vitrificação;Danos do processo;Otimização do crioprotetor

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