微滴噴射ガラス化保存システムは微小な滴サイズを生成し、低濃度の低温保護剤でもガラス化を実現できる。本研究では微滴噴射ガラス化保存システムを用いてHepG2細胞をガラス化保存し、保護剤の負荷過程、噴射過程、受け取り過程およびガラス化・再温過程が細胞に与える損傷程度を検討した。また、保護剤中のMe2SO濃度を低減し、適切な量のトレハロースを添加することで保護剤の組成を最適化した。結果は、微滴噴射ガラス化保存の各過程が細胞に損傷を与え、特に保護剤負荷過程、噴射過程、ガラス化および再温過程での損傷が大きく、薄片受け取り過程での損傷は小さいことを示した。さらに、保護剤中のMe2SO濃度の低下に伴い、低温保存後の細胞活性が顕著に低下し、保護剤濃度が同じ場合はガラス化保存の効果が徐冷凍よりも優れていた。適量のトレハロースは低温保存効果を強化するが、過剰では逆効果となった。5％Me2SO＋0.3mol/Lトレハロースを低温保護剤として使用した場合、細胞生存率は(92.42±0.95)％、24時間後の接着率は(95.64±1.03)％に達し、微滴噴射ガラス化の効果が最も良好であった。

微滴噴射;ガラス化;過程損傷;保護剤最適化