摘要
細胞マイクロドロップのガラス化保存法は低温保存分野で広く注目されていますが、マイクロドロップのガラス化過程には冷却／再加温過程の制御不能という制限があります。移動ステージの昇降とジュール熱による再加温法を組み合わせて、細胞マイクロドロップのガラス化過程における制御可能で迅速な冷却および再加温を実現する凍結保存システムを構築しました。本システムは、液体窒素への浸漬速度を調整して迅速かつ制御可能な冷却を実現し、ジュール熱の加熱時間と電流量を制御することで高速の再加温過程を達成し、マイクロドロップのガラス化過程を実現しながら、液滴の再加温過程における逆ガラス化による細胞へのダメージを著しく回避します。結果は、本システムが制御可能な冷却速度を1.8×10^4 ℃/分に達成でき、低濃度保護剤下での細胞マイクロドロップのガラス化保存が可能であることを示しています。再加温速度は4.0×10^4 ℃/分まで制御可能であり、低濃度保護剤の再加温過程における逆ガラス化および氷晶の再成長を効果的に防止します。微小滴A549細胞の低温保存効果により、本システムの凍結復温後の生存率が従来のマイクロチューブ保存よりも著しく高いことが確認されました。本研究は細胞マイクロドロップの自動ガラス化保存および再加温法に新たな解決策を提供することが期待されます。
关键词
ガラス化;ジュール熱;冷却および再加温速度;細胞マイクロドロップ