Analyse des dommages du processus de vitrification par microgouttelettes et optimisation de l'agent protecteur

Peng Tian ,  

Zhang Xiaomin ,  

Zhou Xinli ,  

摘要

Le système de vitrification par microgouttelettes génère des gouttelettes de petite taille, permettant la vitrification à faible concentration d'agent cryoprotecteur à basse température. Cette étude utilise ce système pour vitrifier les cellules HepG2 et analyse les dommages cellulaires causés par les processus de chargement de l'agent, de pulvérisation, de réception et de vitrification/réchauffement. La formule de l'agent protecteur a été optimisée en réduisant la concentration de Me2SO et en ajoutant une quantité appropriée de tréhalose. Les résultats montrent que toutes les étapes du processus causent des dommages aux cellules, avec des dommages plus importants lors du chargement de l'agent, de la pulvérisation, de la vitrification et du réchauffement, tandis que le processus de réception cause moins de dommages. De plus, la diminution de la concentration de Me2SO dans l'agent protecteur réduit considérablement la viabilité des cellules après la préservation à basse température; à concentration égale, la vitrification est plus efficace que la congélation lente; une quantité appropriée de tréhalose améliore l'efficacité de la conservation à basse température, mais un excès a un effet inverse; avec 5% de Me2SO + 0,3 mol/L de tréhalose comme agent protecteur, la viabilité cellulaire atteint (92,42±0,95)%, le taux d'adhérence après 24 h est de (95,64±1,03)%, la vitrification par microgouttelettes donne les meilleurs résultats.

关键词

Microgouttelettes;Vitrification;Dommages du processus;Optimisation de l'agent protecteur

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