Das Mikrotropfen-Vitrifikationssystem erzeugt kleine Tropfengrößen und ermöglicht Vitrifikation bei niedrigen Konzentrationen von Krioprotektoren bei niedrigen Temperaturen. In dieser Studie wurde das Mikrotropfen-System zur Vitrifikation von HepG2-Zellen verwendet, um die Schädigung der Zellen während des Ladevorgangs des Krioprotektors, des Sprühvorgangs, des Empfangsvorgangs sowie des Vitrifizierungs-/Auftauvorgangs zu untersuchen. Die Krioprotektorenformel wurde durch Reduzierung der Me2SO-Konzentration und Zugabe einer geeigneten Menge Trehalose optimiert. Die Ergebnisse zeigen, dass alle Prozesse des Mikrotropfen-Vitrifikationssystems Zellschäden verursachen; der Ladevorgang des Krioprotektors, der Sprühvorgang, die Vitrifikation und das Auftauen verursachen größere Zellschäden, während der Empfangsvorgang geringere Schäden verursacht. Außerdem nimmt die Zellaktivität nach der Kryokonservierung bei abnehmender Me2SO-Konzentration deutlich ab; bei gleicher Konzentration ist die Vitrifikation effektiver als das langsame Gefrieren; eine angemessene Menge Trehalose verbessert die Kälteschutzwirkung, während eine Überdosierung einen gegenteiligen Effekt hat; bei Verwendung von 5% Me2SO + 0,3 mol/L Trehalose als Kälteschutzmittel zur Vitrifikation beträgt die Zellüberlebensrate (92,42±0,95)%, und die Haftungsrate nach 24 Stunden (95,64±1,03)%; die Mikrotropfen-Vitrifikation zeigte die besten Ergebnisse.

Mikrotropfen;Vitrifikation;Prozessschädigung;Optimierung des Kälteschutzmittels